河北聚丙烯酰胺的凝胶技术！

聚丙烯酰胺的凝胶技术！

聚丙烯酰胺的凝胶技术！

聚丙烯酰胺凝胶作为电泳是分离，鉴定，纯化和制备DNA片段的最常用教学方法，也用于RNA的纯化和分离。絮凝剂该产品的分子能与分散于溶液中的悬浮粒子架桥吸附，有着极强的絮凝作用。聚丙烯酰胺有机高分子絮凝剂具有在颗粒间形成更大的絮体由此产生的巨大表面吸附作用。阳离子聚丙烯酰胺在水处理工业中的应用主要包括原水处理、污水处理和工业水处理3个方面。在原水处理中，PAM与活性炭等配合使用，可用于生活水中悬浮颗粒的凝聚和澄清；在污水处理中，PAM可用于污泥脱水；在工业水处理中，主要用作配方药剂。近十年来，随着知识分子结构生物学的迅速经济发展，对DNA电泳，染色和分析的要求企业越来越多越高。基于中国多年的工作生活经验，我们总结了自己一套可以快速，高效，高分辨率的DNA聚丙烯酰胺以及凝胶根据电泳，银染和干胶技术。

1、凝胶的配制

材料: 10汤匙缓冲液，30% 丙烯酰胺二丙烯酰胺，n，n，n，n-四甲基乙二胺(TEMED) ，40% 过硫酸铵，3个上样缓冲液(40% 蔗糖，3tBE，0.01% 溴酚蓝)。

灌胶：按表1中分离胶与浓缩胶的配方配制。 安装填充有凝胶的玻璃板，混合用于分离凝胶的组分，填充到适当高度，并且立即用去离子水填充上部以隔离空气。 分离凝胶聚合后(约15分钟)，除去去离子水。 混合浓缩凝胶的组分，加入分离的凝胶，插入梳子，等待10分钟后浓缩凝胶聚合。 取下齿梳并放在一边。

上样:将样品和上样缓冲液以3:1的比例混合。上样量为1~10l，PCR扩增产物一般为3~5l，DNA浓度约为0.1~1g\\u002F井。

　　2、电泳

使用恒流电泳。浓缩形成凝胶的电流应略小，一般为10~15mA。样品完全可以进入中国分离得到凝胶后，加倍（30mA）。将示踪剂溴酚蓝电泳至凝胶结构底部以完成电泳。

3染色

采用银染色法。 在染色过程中，试剂的纯度和温度直接影响染色时间和染色效果。 建议染色温度应保持在45～50 ℃。 如果染色温度较低，应延长染色时间。 因此，制备的试剂在加热前应在培养箱中预热。 染色方法如下：凝胶去除固定：10%乙醇硝化5分钟：1%硝酸5分钟，去离子水3次，银染色30秒各：0.1硝酸银2次，去离子水5分钟2次，每30秒显影：3%碳酸钠，0.05%甲醛5min（取决于颜色效果），固定： 10%醋酸5min，用去离子水洗涤3次，甘油浸泡5min，每30s。 注意，如果在室温下染色时间是上述时间的约2倍。

　　4 干胶

将两片玻璃纸浸泡在水中后，将其中一片涂在玻璃板上，将3% 甘油溶液浸泡的电泳凝胶涂在玻璃纸上，再将另一片透明薄膜覆盖在玻璃纸上消除气泡。把剩下的玻璃纸堆在玻璃后面，然后在上面压另一块玻璃板。玻璃板的末端用橡皮筋固定，并在室温下干燥12小时。